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液相色譜儀相關(guān)知識
更新時間:2017-06-13   點擊次數(shù):2971次
液相色譜法是分析化學(xué)中發(fā)展zui快、應(yīng)用zui廣的一種分析方法,特別是液相色譜儀已經(jīng)成為生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等方面*的重要檢測方法?,F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)的發(fā)展使得分析對象越來越復(fù)雜,分析要求越來越高,液相色譜的強大功能使其成為新世紀中解決生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)等復(fù)雜體系發(fā)現(xiàn)難題的zui有力的技術(shù)和方法。

液相色譜儀是在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上,引入氣相色譜的理論和技術(shù)而發(fā)展起來的。在液相色譜中,流動相與組分之間有一定的親和力,分離過程的實現(xiàn)是組分、流動相和固定相三者間相互作用的結(jié)果,分離不但取決于組分和固定相的性質(zhì),還與流動相的性質(zhì)密切相關(guān),一般情況下,液相色譜儀的分析可在室溫下進行,由于采用顆粒極細的固定相,柱內(nèi)壓降很大,加上流動相黏度高,因此必須采用高入口壓,以此來維持一定的流動相線速。液相色譜儀對于揮發(fā)性低、熱穩(wěn)定性差、分子量大的物質(zhì)特別有利,它在醫(yī)藥、生化等方面具有非常重要的作用。
 
色譜柱的常見問題:

1.色譜柱污染:
目前,基層實驗室多采用反相色譜柱,要減少色譜柱的污染zui有效的辦法是要純化樣品。凡是樣品純化得越干凈,色譜柱的壽命就越長;反之,只有提取沒有純化的樣品,色譜柱柱效就會大幅下降。一般來說,要提取純化好的樣品,的方法是用流動相溶解樣品,這樣,一方面能減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也能檢查樣品在流動相中的溶解性。如果樣品進樣后在流動相中沉淀,會堵塞進樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)鬼峰。如果出現(xiàn)樣品與流動相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,可更換樣品溶劑,或改進樣品純化處理的方法,或濾過去除不溶性物質(zhì)。
2.色譜柱阻塞與對策
如果配有保護柱,應(yīng)先去掉保護柱進行分析。如果色譜柱阻塞,可進行反沖洗。如果問題仍然存在,色譜柱可能被強保留的污染物損壞,建議使用恰當(dāng)?shù)脑偕绦?。如果問題仍然存在,可能是進口阻塞,更換入口處的篩板或更換色譜柱。如果必要,亦可更換色譜柱。
3.嚴格清場
清洗的過程是延長色譜柱壽命的關(guān)鍵,每次分析工作結(jié)束時,要做好清場工作。如果流動相是緩沖鹽,先用5%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動相是離子對,先用50%甲醇水沖洗30 min以上;如果流動相是酸性溶劑,先用純水沖洗30 min以上,流速0.5 mL#min-1,zui后過度到用色譜甲醇沖洗色譜柱,目的是沖去吸附在柱上的強保留組分。如果用甲醇-水為流動相也應(yīng)這樣沖洗色譜柱,在一定程度上可恢復(fù)柱效。

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